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本试剂盒包括SDS-PAGE凝胶(SDS聚丙烯酰胺凝胶)制备所需全套试剂，只需自备纯水和制胶器具，即可制备高质量各种浓度的变性PAGE凝胶。试剂盒中的4×分离胶缓冲液(用于配制分离胶)和4×浓缩胶缓冲液(用于配制浓缩胶)分别含有Tris-HCl (pH8.8)、SDS和Tris-HCl (pH6.8)、SDS，使用时无需再加入SDS，方便、快捷。本试剂盒大约可以配制30～50块常规大小的PAGE胶，具体配制的量应根据器具大小决定。

• APS溶液不稳定，应尽量减少室温存放时间，每次取用后立即放回冰箱，以防失效；若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20℃保存的10% APS。
  
• 温度较低时，4X分离胶缓冲液和4X浓缩胶缓冲液中的SDS可能析出，请在水浴中温育，并在完全溶解和混匀后使用。
  
• PAGE凝胶的凝聚速度与温度以及APS、TEMED的用量密切相关；在其它条件不变的情况下，可通过改变APS及TEMED的用量，控制PAGE凝胶的聚合速度，凝胶聚合过快不利于操作；附表中的APS及TEMED量可供参考，应根据实际操作情况做适当的调整。
  
• 在凝胶配制过程中，尤其是液体混匀步骤，应尽量避免气泡的产生。
  
• 在分离胶上层加纯水时要小心操作，加水时速度不能太快。
  
• TEMED有轻微刺激性气味，易燃，有腐蚀性，使用时注意防护。
  
• 配胶用丙烯酰胺有神经毒性，可通过皮肤吸收，其作用具有积累性，配制时应戴手套。聚丙烯酰胺(聚合后)无毒，但也应谨慎操作，因为有可能含有少量的未聚合成分。
  
• 为了您的安全和健康，操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。

• 配制10% APS：用5mL蒸馏水溶解0.5g APS(过硫酸铵)，充分溶解后分装成小管储存于-20℃。
  
• 灌制分离胶
  
  • 根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度，最佳胶浓度请参考附表1选择，各试剂使用量请参考附表2。
    
  • 参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
    
  • 将不同体积的30% Acr-Bis (29:1)、4×分离胶缓冲液和纯水在小烧杯或试管中混合。
    
  • 加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
    
  • 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1cm的水层，使凝胶表面保持平整。
    
  • 静置30～60分钟，待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后，说明凝胶已聚合。
• 灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表3)
  
  • 去除覆盖在分离胶上的水层。
    
  • 将不同体积的30% Acr-Bis (29:1)、4×浓缩胶缓冲液和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
    
  • 加入10% APS和TEMED，轻轻搅拌使其混匀，避免产生气泡。
    
  • 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面，直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
    
  • 将梳子慢慢插入凝胶内，避免产生气泡。
    
  • 静置10～20分钟，等待浓缩胶聚合。
    
  • 待凝胶聚合后，小心地拔出梳子，以免破坏加样孔。
    
  • 进行常规电泳操作。